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Y2HGold酵母雙雜交菌株 貨號:st082
基因型:
MATa,trp1-901,leu2-3,112,ura3-52,his3-200,gal4Δ,gal80Δ,LYS2::GAL1UAS–Gal1TATA–His3,GAL2UAS–Gal2TATA–Ade2URA3: :MEL1UAS–Mel1TATAAUR1-C MEL1

信息:
培養基:YPDA
菌株類別:酵母菌
培養條件:28℃,有氧,YPDA
質粒轉化:電激
保存方式:30%甘油,-20℃
基本應用:用于酵母雙雜交

菌株簡介:
Y2HGold菌株是Clontech公司開發的GAL4系統酵母雙雜實驗用菌株,MATa型,可直接轉化質?;蚺cMATα型酵母菌株Y187通過mating操作進行蛋白互作驗證或篩庫試驗。Transformation  marker為: trp1, leu2,報告基因為:AbAr, HIS3, ADE2, MEL1。Y2HGold -GAL4酵母雙雜系統需要兩種質粒配套使用:PGBKT7和PGADT7。質粒PGBKT7的篩選標志為TRP1,用于表達DNA-BD(來自酵母轉錄因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)與目標蛋白(Bait)的融合蛋白;質粒PGADT7的篩選標志為LEU,用于表達AD(GAL4 C端768 ~881 位氨基酸)與目標蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4系統原理:一個完整的酵母轉錄因子GAL4可分為功能上相互獨立的兩個結構域:位于N端1 ~ 174位氨基酸區段的DNA結合域(DNA-BD)和位于C端768 ~881 位氨基酸區段的轉錄激活域(AD)。DNA-BD能夠識別GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS,并與之結合。而AD可以啟動UAS下游的基因進行轉錄。BD和AD單獨存在不能激活轉錄,但當二者接近時,則呈現完整的GAL4活性,使含有UAS的啟動子下游基因轉錄表達。正常條件下,BD不與AD結合,將要檢測的蛋白質分別與BD和AD融合,形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和 prey 融合蛋白(prey-AD),如果 bait 和 prey發生相互作用,就會促使 BD 和 AD 的相互接近,形成完整的GAL4,從而激活報告基因的轉錄。Y2HGold有四個報告基因:AbAr, HIS3, ADE2, MEL1,分別由三種不同的啟動子(G1,G2,M1)啟動,這三種啟動子只有GAL4識別的17bp核心區相同,其余部分均不同,大大降低了酵母雙雜假陽性發生的概率。此外新報告基因AbAr與以前的營養缺陷報告基因相比具有更低背景的優點,也可以降低酵母雙雜假陽性發生的概率

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